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遵循顯微鏡設(shè)計(jì)須符合樣品要求的原則,創(chuàng)建了一套完全模塊化的成像平臺(tái),可以滿足多種實(shí)驗(yàn)需求。與傳統(tǒng)的研究技術(shù)(例如使用微電極)相比,我們的多光子成像系統(tǒng)能夠以更快速度、更大深度和更高強(qiáng)度同時(shí)讀出和操縱神經(jīng)元群。我們開(kāi)發(fā)了一個(gè)旋轉(zhuǎn)主體,使顯微鏡可繞樣品旋轉(zhuǎn)。我們還提供各種剛性主體,其具7.74英寸高度,可圍繞物鏡提供較大的三維工作空間。
神經(jīng)元活動(dòng)的體內(nèi)體積成像需要亞微米級(jí)空間分辨率和毫秒級(jí)時(shí)間分辨率。傳統(tǒng)方法通過(guò)連續(xù)掃描衍射高斯光束以創(chuàng)建3D圖像,而基于貝塞爾光束的多光子成像依靠軸向延伸的焦點(diǎn)來(lái)捕獲體積圖像。激發(fā)光束的擴(kuò)展景深可創(chuàng)建3D體積的2D投影,從而有效地將2D幀速率轉(zhuǎn)換為3D體積速率。
三光子激發(fā)非常適合深層組織成像,且需要高脈沖能量激發(fā)源,通常在1300 nm或1700 nm附近。與雙光子成像相比,三光子成像可減少組織散射并降低離焦背景,從而提高信噪比。
Thorlabs的空間光調(diào)制器(SLM)使用全息圖案來(lái)同時(shí)刺激樣品中多個(gè)位置的光活化。SLM設(shè)計(jì)用于通過(guò)飛秒脈沖進(jìn)行雙光子激發(fā),SLM可控制激勵(lì)激光束輪廓上的相位以生成數(shù)百個(gè)用戶確定的焦點(diǎn)。
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